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类器官（或细胞）的冻存

1. 向回收后的类器官（或细胞）中加入预冷的（2-8℃）OrganoidCryopreservationMedium类器官冻存液 ，吹打混匀后迅速转移至细胞冻存管中（冻存管内细胞悬液体积应大于0.5mL） 。
   注意 ：每1mL冻存液推荐冻存1x10³-1x10⁷个细胞或对应细胞量的类器官 。
2. 将冻存管放入细胞冻存降温盒内（降温盒须提前平衡至室温或4℃） ，随后立即将降温盒放入-80℃超低温冰箱中 ；也可将冻存管进行人工梯度降温处理 ，如4℃静置10分钟 ，-20℃保存1小时 ，-80℃保存过夜 。
3. 次日或12小时后将冻存管于低温条件下（不高于-70℃ ，推荐使用干冰或原降温盒）转移至液氮中长期保存 。

类器官（或细胞）的复苏

1. 取10ml类器官培养缓冲液于15ml离心管中 。
2. 从液氮罐中取出冻存的类器官细胞 ，快速置于37℃水浴锅中融解 。
3. 水浴融解过程中 ，需轻轻摇动冷冻管 ，以确保冻存液在1-2分钟内完全融解 。
4. 将溶解后的类器官细胞快速转移至15ml离心管 ，使用移液管轻轻吹打6-8次，300g离心5分钟 ，然后除去上清液并收集类器官细胞沉淀 。添加适量类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管300g离心5min 。
5. 基质胶重悬 ，每孔25μl基质胶铺在24孔细胞培养板中 ，放置培养箱中10-15min成胶 ，添加500μl类器官培养基 。