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类器官的消化传代

1. 移液器吸去培养基 ，每孔添加1ml4℃类器官缓冲液放置2min 。移液抢轻柔吹打基质胶 ，收集在15ml离心管中 ，4℃静置10min。（每6-8孔为一组）。
2. 离心5min弃去上清 ，添加适量类器官传代消化液，消化2-3min ，添加5倍体积类器官缓冲液终止消化 ，离心5min弃去混合液 ，添加类器官缓冲液重悬移入1.5ml离心管 ，300g离心5min弃去液体进行第3步

注意 ：

1.在此操作过程中须仔细监测消化过程 ，避免过度消化 。在消化过程中 ，使用移液器吹打混匀帮助消化 。也可实时取少量消化悬液于显微镜下观察消化情况 ，当观察到较多的单细胞或直径在50μm以下的细胞簇后 ，即可认为消化完成。
2.在确认消化完成的悬液中 ，加入至少5倍体积的类器官缓冲液进行稀释 ，从而终止消化作用 。
(3)将上步骤所获类器官沉淀可用于后续类器官培养 、冻存等实验操作 。