产品特点
● 安全
:无蛋白
,无动物源成分
,化学成分明确
;
● 广谱
:普遍适用于多种类型细胞系(如 hMSC
、PBMC
、CHO
、HEK293 等)
;
● 高效
:细胞复苏率高
,多种细胞的复苏活率在 90% 以上
;
● 方便
:即用型
,无需额外配制
;
● 简捷
:可适用于细胞冻存多种简化操作
,可适用非程序化冻存
,不需进行程序降温
,可直接置于-80℃环境保存
。
操作方法
一
、细胞冻存
以下操作以脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)的冻存为例简述细胞冻存液的操作方法
,hUC-MSCs 的培养推荐使用无血清培养基培养(ExcellBio
,ME000-N015)
。
1. 将生长状态良好的 hUC-MSCs
,用重组胰蛋白酶消化 2min
,用胰蛋白酶抑制剂终止消化
,重悬细胞
,300g 离心 5 分钟
,弃上清;
提示
:对于悬浮培养细胞
,可直接离心收集细胞
。
2. 加入适当体积的 PBS 重悬细胞
,细胞计数
,计算细胞总量
;
3. 再次以 300g 离心 5min 收集细胞
,弃上清
;
4. 根据冻存密度需要
,添加适量 Optivitro® 无蛋白
,CD 细胞冻存液
,反复吹吸 4-5 次使细胞分散均匀
,重悬细胞
;
提示
:冻存密度可根据需要调整
,贴壁细胞冻存密度推荐0.5-5×106 /mL
,悬浮细胞如CHO 等推荐
0.1-2×107 /mL
。
5. 将细胞悬液转移至冻存管内
,旋紧管盖
,做好标记
;
6. 将冻存管放入程序降温盒(Excellbio
,CS041-0001)内
,转移至-80℃冰箱过夜(或储存 6h 以上)
;
7. 将细胞冻存管从-80℃冰箱内取出
,迅速转移至-196℃液氮或气象罐中长期保存
;
提示
:对于较长期保存细胞,建议每5-10 年复苏鉴定细胞状态
。
二
、细胞复苏
1. 复苏准备
:开启水浴锅
,调整温度
,使水浴锅内水温稳定在 37℃
;细胞培养基 37℃预温
;确认细胞存放的位置
;
Web
:www.excellbio.com
Tel
:400 820 5021
2. 取出细胞
,确认标签
,迅速转移至 37℃水中
,不断摇动冻存管并观察其中的冰块解冻情况(约需要 2~3min)
;
3. 当冻存管中的冰块即将完全融化时
,将其从水浴锅中取出
,用 75%酒精充分清洁外表面后
,移入生物安全柜或超净工作台内
;
提示
:摇动时避免水浴浸没冻存管盖
;尽量缩短解冻时间
;避免冻存管内冻存液溶解后升温
。
4. 用 75%酒精棉球再次清洁冻存管口
、管壁
;
5. 打开冻存管
,用移液器轻柔混匀后
,将细胞悬液转移至预温的完全培养基内
,轻柔吹打悬液
,使细胞混合均匀
;
提示 1
:逐滴加入
,或轻柔操作
,每毫升冻存液推荐加入至5-10mL完全培养基内
。
提示 2
:洗涤并收集冻存管内残液
,有利于提高珍贵细胞回复苏收率
。
6. 280g 离心 5min
,收集细胞
,弃上清
;
7. 加入适量培养基再次重悬细胞
,进行细胞计数
,计算细胞密度
;
8. 按照细胞类型或研究需要
,接种适当密度的细胞至合适的培养器皿内
,摇匀后
,转移至培养箱中培养
。